1.1 實驗儀器和材料

       實驗儀器包括高壓滅菌器,電子天平,pH計,溫度計,無菌操作臺,生化培養(yǎng)箱,恒溫振動儀,離心機,移液槍,電子顯微鏡,培養(yǎng)皿若干,錐形瓶若干,封口紙,酒精燈,接種環(huán)等。航空煤油樣品取自天津濱海國際機場航空煤油廢棄罐底部,航空煤油呈棕黃色渾濁狀態(tài)。由于航空煤油中主要含有細菌和真菌,因此,本實驗主要研究真菌和細菌的分離和鑒定。本實驗分離微生物時采用的是固體培養(yǎng)基,其中1L真菌培養(yǎng)基的組成如下:硝酸鈉3.0090g,硫酸亞鐵0.0120g,磷酸氫二鉀1.0242g,蔗糖30.1209g,硫酸鎂0.5628g,瓊脂粉20.0892g,向培養(yǎng)基中加入少量稀硝酸,使pH值調(diào)至6.8左右。1L細菌固體培養(yǎng)基組成如下:牛肉膏5.6561g,蛋白胨10.0243g,氯化鈉5.0990g,瓊脂粉21.2350g,加入少量氫氧化鈉溶液,使pH值調(diào)至7.2左右。本實驗富集微生物時采用液體培養(yǎng)基,只需把瓊脂粉劑量減半即可。

1.2.實驗方法

1.2.1 航空煤油中微生物的富集、分離和鑒定

1)微生物富集

在高壓蒸汽滅菌器內(nèi)調(diào)節(jié)表壓大約為0.1MPa,溫度為121 ,將培養(yǎng)基滅菌20min左右,并且在無菌操作下倒入培養(yǎng)皿內(nèi),待溫度適宜后開始微生物的富集培養(yǎng)。富集真菌時,加入80%(體積分數(shù))的乳酸溶液數(shù)滴,以抑制細菌生長。

2)分離

將富集后的真菌采用倍數(shù)稀釋法進行分離,富集時在液體培養(yǎng)基中進行,分離時采用固體培養(yǎng)基,便于微生物菌落的觀察和挑取[7]。

3)生長實驗

將富集分離后得到的純種微生物菌株用接種環(huán)在無菌條件下接種到滅菌后的無機鹽固體培養(yǎng)基上,加入滅菌標準航空煤油作為唯一碳源,在生化培養(yǎng)箱內(nèi)于恒溫32 進行培養(yǎng),觀察菌株能否在唯一碳源培養(yǎng)基上生長。若生長,則表明該菌株為能在航空煤油中生長的菌株;反之,則表明該菌株可能是在操作過程中的污染菌株。將能在唯一碳源培養(yǎng)基上生長的菌株保存,以備鑒定。1.2.2